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DNS試劑說明書

貨號：D7800

規(guī)格：100mL/500mL

保存：4°C避光保存，12個月有效。

產(chǎn)品說明：

   植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)性狀，長以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖（如麥芽糖）含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。

   DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測（硝基水楊酸法）的成分之一，其檢測原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在540nm處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水

2、50mL離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟：（僅供參考）

1、還原糖的提取：

（1）稱取植物樣品0.5-3g，剪碎，加入蒸餾水約3mL勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

（2）50°C水浴30min，并不時攪拌，以便還原糖*浸出。

（3）將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50mL離心管，4000g離心5min。

（4）留取上清液，向沉淀中加入20mL蒸餾水，混勻，再次4000g離心5min。

（5）留取上清液，將二次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至100mL（提取液），混勻，作為還原糖待測液。

2、總糖的水解和提取：

（1）稱取植物樣品0.5-3g，剪碎，加入蒸餾水約3mL勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

（2）向容器中加入10mL 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸30min，并不時攪拌。

（3）取兩滴滴加于載玻片上，滴加一滴顯色液，檢查水解是否*，如已經(jīng)水解*，則不顯示藍(lán)色。

（4）水解完畢后，冷卻至室溫，加入6M氫氧化鈉溶液，使溶液pH至7.4，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4000g離心5min或過濾。

（5）取上清或濾液10mL，用蒸餾水定容至100mL，成稀釋1000倍的總糖水解液（提取液），取1mL總糖水解液，測定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以0號調(diào)零，檢測540nm處吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、還原糖測定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1mL，分別加入DNS試劑2mL，其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm處測定各管的吸光度。

計算：

還原糖的百分含量（%）=（C×VT）/（m×VS）×100

總糖的百分含量：

總糖含量（%）=（C×VT）/（m×VS）×100×10×0.9

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量（mg）

     VT=提取液的體積（mL）

     m=植物樣品的質(zhì)量（mg）

     VS=測定時用的樣品體積（mL）

注意事項：

1、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2、待測樣本如不能及時測定，應(yīng)置于2-8°C保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

3、如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

4、總糖 計算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時使用，×0.9是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時所消耗的水量。

相關(guān)文獻(xiàn):

[1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138. (IF 2.332)